ОКРАСКА КИСЛОТОУСТОЙЧИВЫХ БАКТЕРИЙ ПО ЦИЛЮ-НИЛЬСЕНУ.

Кислотоустойчивые бактерии отличаются высоким содержанием липидов в кле­точной стенке. Они с трудом окрашиваются, но затем удерживают основной кра­ситель при обесцвечивании кислотой. Некислотоустойчивые бактерии обесцвечи­ваются кислотой и окрашиваются дополнительным красителем. .

Mycobacterium tuberculosis в мокроте больного.
Окраска по Цилю-Нильсену. Увеличение х___________________

ОКРАСКА СПОР ПО ОЖЕШКО.

Метод Ожешко сходен с методом Циля-Нильсена, но отличается использованием раствора соляной кислоты в качестве протравы, разрыхляющей оболочку споры, которая плохо воспринимает красители.

Окраска по Ожешко. Увеличение х_

ОКРАСКА ВОЛЮТИНА ПО НЕИССЕРУ.

При окраске метиленовым синим образуется нерастворимый в воде комплекс: кра­ситель + волютин. При промывке водой тело микробной клетки обесцвечивается, а гранулы волютина сохраняют синюю окраску. Тело клетки затем докрашивается везувином в желтый цвет.

Corynebacterium diphtheriae. Окраска по Нейссеру. Увеличение х_

БАКТЕРИОСКОПИЧЕСКИЙ МЕТОД ДИАГНОСТИКИ

Бактериоскопический метод диагностики -______________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________

Метод используется для диагностики заболеваний, возбудители которых обладают характерными морфологическими, тинкториальными свойствами и типичной ло­кализацией в организме. Например: гонорея, сифилис, возвратные тифы, туберку­лез, некоторые микозы.

Микробиология, вирусология, иммунология: Методические указания для самостоятельной работы и к практическим занятиям для студентов лечебного, педиатрического и стоматологического факультетов. Часть I , страница 4

6. Способ Бури (выявление капсул): на конец предметного стекла наносят каплю туши и петлю исследуемого материала. Смесь перемешивают петлей и готовят мазок вторым предметным стеклом как мазок из крови. Высушивают на воздухе и, не фиксируя, микроскопируют с иммерсионной системой. Фон препарата окрашен в темно-дьпмчатый цвет, микробные тела и капсулы не окрашиваются и остаются бесцветными (негативный способ).

7. Способ Боголепова (для выявления капсул): негативный метод, при котором используется 2% колларгол, техника приготовления препарата аналогичная способу Бурри. Фон препарата окрашен в коричневый цвет, тела микробных клеток окрашены в коричневый цвет, а капсула – в виде светлого ободка вокруг микробной клетки.

8. Способ Гинса (для выявления капсул): 1) по способу Бурри готовят препарат; 2) фиксируют этиловым спиртом 15-20 мин, промы­вают препарат; 3) окрашивают карболовым фуксином Циля, разведенным 1:3 в течение 3-5 мин; 4) промывают водой, высушивают и микроскопируют с иммерсионной системой. На темном фоне препарата контрастно выделяется неокрашенные капсулы, внутри которых находятся бактерии ярко-малинового цвета.

Таблица 3. Отличительные признаки грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов

1-шаровидные микробы; за исключением менингококков и гонококков;

2-палочковидные микробы (не образующие споры);

Строение клеточной стенки (КС)

Однослойная клеточная стенка, состоящая из 6-8 рядов пептидогликана+полиса-харид+

Двухслойная клеточная стенка: внутренний слой – пептидогликан, наружный слой представлен комплексом липополисахаридов (ЛПС), фосфолипидов, белков и липопротеидов

Строение цитоплазматиче-ской мембраны (ЦПМ)

Не связана с КС, имеет многочисленные выросты в цитоплазму

Тесно связана с КС, имеет незначительное число выростов в цитоплазму

Особенности строения жгутикового аппарата

Одна пара колец для закрепления жгутиков на уровне ЦПМ

Две пары колец: одна расположена на уровне ЦПМ; вторая – на уровне КС

Образуют экзо- и содержат эндотоксины (ЛПС)

Соматический О-антиген (ЛПС)

(-), иногда (+), образуют сферопласты

9. Окраска спор методом Ожешко: на нефиксированный препарат наливают несколько капель 0,5% раствора соляной кислоты и подогревают 1-2 мин над спиртовкой до закипания, остатки кислоты сливают; 2) промывают водой, сушат на воздухе и фиксируют в пламени; 3) окрашивают карболовым фуксином Циля с подогреванием до отхождения паров (3-5 мин); 4) обесцвечивают 5% раствором серной кислоты в течение нескольких секунд и промывают водой; 5) докрашивают метиленовой синью 3-5 мин. Споры окрашиваются в красный цвет, а вегетативные тела бактерий в синий цвет.

10. Окраска спор методом Ганзена (видоизмененный метод Циль-Нильсена): 1) фиксированный препарат окрашивают карболовым фуксином Циля с подогреванием (подогревают на пламени спиртовки до отхождения паров) и охлаждают в течение 2-3 минут, затем промывают водой; 2) обесцвечивают раствором серной кислоты, погружая 2-3 раза в раствор и тщательно промывают водой; 3) окрашивают водно-спиртовым раствором метиленового синего 3-5 минут, промывают водой, высушивают, микроскопируют с иммерсией. Споры окрашиваются в красный цвет, вегетативные клетки – в синий.

11. Окраска бактериального ядра: на предметном столе готовят мазок, высушивают на воздухе и фиксируют парами 2% раствора осмиевой кислоты в течение 2-3 минут. Далее мазок подвергают гидролизу в растворе соляной кислоты при 60°С 2-3 мин и немедленно промывают водой. Затем мазок заливают 1% раствором формалина на 1,5 мин и вновь промывают водой. Окрашивают 0,1-1% раствором основного фуксина 1-2 мин, промывают водой, высушивают на воздухе и микроскопируют. На розовом фоне цитоплазмы выделяется нуклеоид, окрашенный в ярко-малиновый цвет.

12. Окраска стенки бактериальной клетки (метод Гутштейна): 1) препарат фиксируют над огнем и протравливают в течение 20-30 мин 5% раствором танина; 2) промывают в течение 60 сек и окрашивают карбол-фуксином 1-2 мин. Микробы окрашиваются в слабо красный цвет, а клеточная стенка – в интенсивно красный цвет.

13. «Раздавленная капля»: на середину предметного стекла нанести петлей каплю исследуемого материала, накрыть ее покровным стеклом. В капле не должно быть пузырьков, жидкость не должна выходить за края стекла. Микроскопируют с иммерсией при опущенном конденсоре. В поле зрения видны бактерии, которые, передвигаясь с помощью жгутиков, совершают круговые и вращательные движения, могут пересекать все поле зрения.

14. «Висячая капля»: используют специальные предметные стекла с углублением (лунка) в центре. Каплю исследуемого материала наносят на середину покровного стекла. Края лунки смазывают вазелином. Предметное стекло накладывают на покровное так, чтобы капля находилась в центре лунки. Затем стекло осторожно переворачивают и капля свободно свисает в центре герметически замкнутой полости лунки. Микроскопируют с иммерсией, наблюдая подвижность клеток.

  • АлтГТУ 419
  • АлтГУ 113
  • АмПГУ 296
  • АГТУ 266
  • БИТТУ 794
  • БГТУ «Военмех» 1191
  • БГМУ 172
  • БГТУ 602
  • БГУ 153
  • БГУИР 391
  • БелГУТ 4908
  • БГЭУ 962
  • БНТУ 1070
  • БТЭУ ПК 689
  • БрГУ 179
  • ВНТУ 119
  • ВГУЭС 426
  • ВлГУ 645
  • ВМедА 611
  • ВолгГТУ 235
  • ВНУ им. Даля 166
  • ВЗФЭИ 245
  • ВятГСХА 101
  • ВятГГУ 139
  • ВятГУ 559
  • ГГДСК 171
  • ГомГМК 501
  • ГГМУ 1967
  • ГГТУ им. Сухого 4467
  • ГГУ им. Скорины 1590
  • ГМА им. Макарова 300
  • ДГПУ 159
  • ДальГАУ 279
  • ДВГГУ 134
  • ДВГМУ 409
  • ДВГТУ 936
  • ДВГУПС 305
  • ДВФУ 949
  • ДонГТУ 497
  • ДИТМ МНТУ 109
  • ИвГМА 488
  • ИГХТУ 130
  • ИжГТУ 143
  • КемГППК 171
  • КемГУ 507
  • КГМТУ 269
  • КировАТ 147
  • КГКСЭП 407
  • КГТА им. Дегтярева 174
  • КнАГТУ 2909
  • КрасГАУ 370
  • КрасГМУ 630
  • КГПУ им. Астафьева 133
  • КГТУ (СФУ) 567
  • КГТЭИ (СФУ) 112
  • КПК №2 177
  • КубГТУ 139
  • КубГУ 107
  • КузГПА 182
  • КузГТУ 789
  • МГТУ им. Носова 367
  • МГЭУ им. Сахарова 232
  • МГЭК 249
  • МГПУ 165
  • МАИ 144
  • МАДИ 151
  • МГИУ 1179
  • МГОУ 121
  • МГСУ 330
  • МГУ 273
  • МГУКИ 101
  • МГУПИ 225
  • МГУПС (МИИТ) 636
  • МГУТУ 122
  • МТУСИ 179
  • ХАИ 656
  • ТПУ 454
  • НИУ МЭИ 641
  • НМСУ «Горный» 1701
  • ХПИ 1534
  • НТУУ «КПИ» 212
  • НУК им. Макарова 542
  • НВ 777
  • НГАВТ 362
  • НГАУ 411
  • НГАСУ 817
  • НГМУ 665
  • НГПУ 214
  • НГТУ 4610
  • НГУ 1992
  • НГУЭУ 499
  • НИИ 201
  • ОмГТУ 301
  • ОмГУПС 230
  • СПбПК №4 115
  • ПГУПС 2489
  • ПГПУ им. Короленко 296
  • ПНТУ им. Кондратюка 119
  • РАНХиГС 186
  • РОАТ МИИТ 608
  • РТА 243
  • РГГМУ 118
  • РГПУ им. Герцена 124
  • РГППУ 142
  • РГСУ 162
  • «МАТИ» — РГТУ 121
  • РГУНиГ 260
  • РЭУ им. Плеханова 122
  • РГАТУ им. Соловьёва 219
  • РязГМУ 125
  • РГРТУ 666
  • СамГТУ 130
  • СПбГАСУ 318
  • ИНЖЭКОН 328
  • СПбГИПСР 136
  • СПбГЛТУ им. Кирова 227
  • СПбГМТУ 143
  • СПбГПМУ 147
  • СПбГПУ 1598
  • СПбГТИ (ТУ) 292
  • СПбГТУРП 235
  • СПбГУ 582
  • ГУАП 524
  • СПбГУНиПТ 291
  • СПбГУПТД 438
  • СПбГУСЭ 226
  • СПбГУТ 193
  • СПГУТД 151
  • СПбГУЭФ 145
  • СПбГЭТУ «ЛЭТИ» 380
  • ПИМаш 247
  • НИУ ИТМО 531
  • СГТУ им. Гагарина 114
  • СахГУ 278
  • СЗТУ 484
  • СибАГС 249
  • СибГАУ 462
  • СибГИУ 1655
  • СибГТУ 946
  • СГУПС 1513
  • СибГУТИ 2083
  • СибУПК 377
  • СФУ 2423
  • СНАУ 567
  • СумГУ 768
  • ТРТУ 149
  • ТОГУ 551
  • ТГЭУ 325
  • ТГУ (Томск) 276
  • ТГПУ 181
  • ТулГУ 553
  • УкрГАЖТ 234
  • УлГТУ 536
  • УИПКПРО 123
  • УрГПУ 195
  • УГТУ-УПИ 758
  • УГНТУ 570
  • УГТУ 134
  • ХГАЭП 138
  • ХГАФК 110
  • ХНАГХ 407
  • ХНУВД 512
  • ХНУ им. Каразина 305
  • ХНУРЭ 324
  • ХНЭУ 495
  • ЦПУ 157
  • ЧитГУ 220
  • ЮУрГУ 306
Смотрите так же:  Развод мужа и жены у них есть сын

Полный список ВУЗов

Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).

Окраска спор по методу Ожешко

1. На нефиксированный мазок нанести 0,5 % раствор хло­ристоводородной кислоты и подогреть в течение 2—3 мин на пламени.

2. Кислоту слить, препарат промыть водой, просушить и фиксировать над пламенем.

3. Окрасить по методу Циля—Нильсена.

Споры бактерий приобретают красный цвет, а вегетативные формы — синий (рис. 2.2.3; на вклейке). Споры бактерий име­ют многослойную клеточную стенку сложного строения, прак­тически непроницаемую для красителей, поэтому для повыше­ния их тинкториальных свойств используют более жесткие условия протравливания, чем для окрашивания кислотоустой­чивых бактерий.

Окраска спор по методу Шеффера—Фултона

1. На фиксированный мазок нанести 5 % раствор мала­хитового зеленого и 3—4 раза нагреть до появления паров.

2. Промыть водой.

3. Докрасить 0,5 % сафранином в течение 30 с.

4. Промыть водой, высушить и микроскопировать.
Споры бактерий окрашиваются в зеленый цвет, вегетатив­
ные клетки — в красный.

185.238.139.36 © studopedia.ru Не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования. Есть нарушение авторского права? Напишите нам | Обратная связь.

Отключите adBlock!
и обновите страницу (F5)

очень нужно

Окраска спор по Ожешко

Схема метода:

Окраска спор Bacillus subtilis по Ожешко. Увеличение________

Окраска волютина по Нейссеру

Схема метода:

Окраска зерен волютина Corynebacterium diphtheriae.

185.238.139.36 © studopedia.ru Не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования. Есть нарушение авторского права? Напишите нам | Обратная связь.

Отключите adBlock!
и обновите страницу (F5)

очень нужно

Окраска по методу Ожешко для выявления спор

На высушенный нефиксированный препарат (мазок готовится толстым и на краю стекла) наливают несколько капель 0,5%-ного раствора соляной кислоты и подогревают 1 – 2 мин. над пламенем горелки до закипания, после чего остатки кислоты сливают.

Остывший препарат промывают водой, подсушивают на воздухе и фиксируют на пламени горелки.

Окрашивают карболовым фуксином Циля (фуксин наливают на фильтровальную бумажку) с подогреванием до появления паров.

Обесцвечивают 5%-ным раствором серной кислоты в течение нескольких секунд.

Докрашивают синькой Леффлера или 1%-ным водным раствором малахитовой зелени в течение 3 – 5 мин.

Споры, окрашенные фуксином, имеют рубиново-красный цвет, вегетативные тела микробных клеток при докрашивании синькой Леффлера – синий цвет, при применении малахитовой зелени – зеленый цвет.

Особенности биологии вирусов

Вирусы — мельчайшие микробы, не имеющие клеточного строения, белоксинтезирующей системы, содержащие только ДНК или РНК. Относятся к царству Vira. Являясь облигатными внутриклеточными паразитами, вирусы размножаются в ци­топлазме или ядре клетки. Они — автономные генетические структуры. Отличаются особым — разобщенным (дисъюнктивным) способом размножения (репродукции): в клетке от­дельно синтезируются нуклеиновые кислоты вирусов и их белки, затем происходит их сборка в вирусные частицы. Сформированная вирусная частица называется вирионом.

Морфологию и структуру вирусов изучают с помощью элек­тронного микроскопа, так как их размеры малы и сравнимы с толщиной оболочки бактерий.

Форма вирионов может быть раз­личной: палочковидной (вирус табачной мозаики), пулевидной (вирус бешенства), сферической (вирусы полиомиели­та, ВИЧ), в виде сперматозоида (многие бактериофаги). Различают просто устроенные и сложно устроенные вирусы.

Простые, или безоболочечные, вирусы состоят из нуклеиновой кисло­ты и белковой оболочки, называемой капсидом. Капсид состоит из повторяющихся морфологических субъединиц — капсомеров. Нуклеиновая кислота и капсид взаимодействуют друг с другом, образуя нуклеокапсид.

Сложные, или оболочечные, вирусы снаружи капсида окружены ли-попротеиновой оболочкой (суперкапсидом, или пеплосом). Эта оболоч­ка является производной структурой от мембран вирус-инфицированной клетки. На оболочке вируса расположены гликопротеиновые ши­пы, или шипики(пепломеры). Под оболочкой некоторых вирусов нахо­дится матриксный М-белок.

Тип симметрии.Капсидили нуклеокапсидмогут иметь спираль­ный, икосаэдрический (кубический) или слож­ный тип симметрии. Икосаэдрическийтип сим­метрии обусловлен образованием изометричес­ки полого тела из капсида, содержащего вирус­ную нуклеиновую кислоту (например, у вирусов гепатита А, герпеса, полиомиелита). Спираль­ныйтип симметрии обусловлен винтообразной структурой нуклеокапсида (например, у вируса гриппа).

Включения — скопление вирионов или отдельных их компонентов в цитоплазме или ядре клеток, выяв­ляемые под микроскопом при специальном окрашива­нии. Вирус натуральной оспы образует цитоплазмати-ческие включения — тельца Гварниери; вирусы герпеса и аденовирусы — внутриядерные включения.

Смотрите так же:  Гражданский адвокат ставрополь

Размеры вирусов определяют с помощью электронной мик­роскопии, методом ультрафильтрации через фильтры с извест­ным диаметром пор, методом ультрацентрифугирования. Одним из самых мелких вирусов является вирус полиомиелита (около 20 нм), наиболее крупным — натуральной оспы (около 350 нм).

Вирусы имеют уникальный геном, так как содержат либо ДНК, либо РНК. Поэтому различают ДНК-содержащие и РНК-содержащие вирусы. Они обычно гаплоидны, т.е. име­ют один набор генов. Геном вирусов представлен различными видами нуклеиновых кислот: двунитчатыми, однонитчатыми, линейными, кольцевыми, фрагментированными. Среди РНК-содержащих вирусов различают вирусы с положительным (плюс-нить РНК) геномом. Плюс-нить РНК этих вирусов выполняет наследственную функцию и функцию информационной РНК (иРНК). Имеются также РНК-содержащие вирусы с отрицатель­ным (минус-нить РНК) геномом. Минус-нить РНК этих виру­сов выполняет только наследственную функцию.

Вирусы поражают позвоночных и беспозвоночных животных, а также растения и бактерии. Являясь основными возбудителя­ми инфекционных заболеваний человека, вирусы также участвуют в процессах канцерогенеза, могут передаваться различными пу­тями, в том числе через плаценту (вирус краснухи, цитомегаловирус и др.), поражая плод человека. Они могут приводить к постинфекционным осложнениям — развитию миокардитов, пан­креатитов, иммунодефицитов и др.

Кроме обычных вирусов, известны и так называемые нека­нонические вирусы — прионы — белковые инфекционные ча­стицы, являющиеся агентами белковой природы, имеющие вид фибрилл размером 10—20×100—200 нм. Прионы, по-видимому, являются одновременно индукторами и продуктами автономно­го гена человека или животного и вызывают у них энцефалопа­тии в условиях медленной вирусной инфекции (болезни Крейтц-фельдта—Якоба, куру и др.).

Другими необычными агентами, близкими к вирусам, явля­ются вироиды — небольшие молекулы кольцевой, суперспи-рализованной РНК, не содержащие белка, вызывающие забо­левания у растений.

Структура и химический состав вирусов и бактериофагов

Вирусы — мельчайшие микробы, не имеющие клеточного строения, белоксинтезирующей системы, содержащие только ДНК или РНК. Относятся к царству Vira. Являясь облигатными внутриклеточными паразитами, вирусы размножаются в ци­топлазме или ядре клетки. Они — автономные генетические структуры. Отличаются особым — разобщенным (дисъюнктивным) способом размножения (репродукции): в клетке от­дельно синтезируются нуклеиновые кислоты вирусов и их белки, затем происходит их сборка в вирусные частицы. Сформированная вирусная частица называется вирионом.

Морфологию и структуру вирусов изучают с помощью элек­тронного микроскопа, так как их размеры малы и сравнимы с толщиной оболочки бактерий.

Форма вирионов может быть раз­личной: палочковидной (вирус табачной мозаики), пулевидной (вирус бешенства), сферической (вирусы полиомиели­та, ВИЧ), в виде сперматозоида (многие бактериофаги). Различают просто устроенные и сложно устроенные вирусы.

Простые, или безоболочечные, вирусы состоят из нуклеиновой кисло­ты и белковой оболочки, называемой капсидом. Капсид состоит из повторяющихся морфологических субъединиц — капсомеров. Нуклеиновая кислота и капсид взаимодействуют друг с другом, образуя нуклеокапсид.

Сложные, или оболочечные, вирусы снаружи капсида окружены ли-попротеиновой оболочкой (суперкапсидом, или пеплосом). Эта оболоч­ка является производной структурой от мембран вирус-инфицированной клетки. На оболочке вируса расположены гликопротеиновые ши­пы, или шипики(пепломеры). Под оболочкой некоторых вирусов нахо­дится матриксный М-белок.

Капсид и суперкапсид защищают вирионы от влияния окру­жающей среды, обусловливают избирательное взаимодействие (адсорбцию) с клетками, определяют антигенные и иммуногенные свойства вирионов. Внутренние структуры вирусов называ­ются сердцевиной.

Тип симметрии.Капсидили нуклеокапсидмогут иметь спираль­ный, икосаэдрический (кубический) или слож­ный тип симметрии. Икосаэдрическийтип сим­метрии обусловлен образованием изометричес­ки полого тела из капсида, содержащего вирус­ную нуклеиновую кислоту (например, у вирусов гепатита А, герпеса, полиомиелита). Спираль­ныйтип симметрии обусловлен винтообразной структурой нуклеокапсида (например, у вируса гриппа).

Включения — скопление вирионов или отдельных их компонентов в цитоплазме или ядре клеток, выяв­ляемые под микроскопом при специальном окрашива­нии. Вирус натуральной оспы образует цитоплазмати-ческие включения — тельца Гварниери; вирусы герпеса и аденовирусы — внутриядерные включения.

Размеры вирусов определяют с помощью электронной мик­роскопии, методом ультрафильтрации через фильтры с извест­ным диаметром пор, методом ультрацентрифугирования. Одним из самых мелких вирусов является вирус полиомиелита (около 20 нм), наиболее крупным — натуральной оспы (около 350 нм).

Вирусы имеют уникальный геном, так как содержат либо ДНК, либо РНК. Поэтому различают ДНК-содержащие и РНК-содержащие вирусы. Они обычно гаплоидны, т.е. име­ют один набор генов. Геном вирусов представлен различными видами нуклеиновых кислот: двунитчатыми, однонитчатыми, линейными, кольцевыми, фрагментированными. Среди РНК-содержащих вирусов различают вирусы с положительным (плюс-нить РНК) геномом. Плюс-нить РНК этих вирусов выполняет наследственную функцию и функцию информационной РНК (иРНК). Имеются также РНК-содержащие вирусы с отрицатель­ным (минус-нить РНК) геномом. Минус-нить РНК этих виру­сов выполняет только наследственную функцию.

Геном вирусов способен включаться в состав генетического аппарата клетки в виде провируса, проявляя себя генетическим паразитом клетки. Нуклеиновые кислоты некоторых вирусов (вирусы герпеса и др.) могут находиться в цитоплазме инфициро­ванных клеток, напоминая плазмиды.

Окраска по Ожешко

Метод основан на принципе окраски кислотоустойчивых бактерий. Отличие заключается в предварительной обработке микроорганизмов 0,5 % раствором соляной кислотой, что облегчает окраску спор карболовым фуксином. Споры кислотоустойчивы, поэтому красятся в красный цвет.

Методика окраски по Ожешко:

1. На нефиксированный мазок нанести 0,5 % раствор соляной кислотой и подогреть на пламени в течение 2-3 мин.

2. Кислоту слить, препарат промыть водой, просушить и фиксировать над пламенем. Затем окрасить по Цилю-Нильсену. Споры бактерий приобретают красный цвет, а вегетативные формы — синий.

Окраска по Романовского-Гимза.

Методика окраски по Романовскому-Гимза:

Краска Романовского-Гимза состоит из метиленового синего, эозина и азура.

1. На мазок наносят рабочий раствор красителя (2 капли красителя на 1 мл дистиллированной воды) на 10-20 мин.

2. Препарат промывают водой и высушивают на воздухе.

Трепонемы окрашиваются в бледно-розовый цвет, боррелии — в фиолетовый цвет, лептоспиры — в розовый цвет. Сапрофитные (непатогенные) формы окрашиваются в синий цвет. Морфологию спирохет изучают также в живом состоянии в фазово-контрастном или темнопольном микроскопе. Хорошим методом выявления спирохет является серебрение по Морозову.

К работе № 3 Теоретическая справка

Исследование микроорганизмов в живом состоянии для изучения форм и подвижности.

Техника приготовления препаратов «висячая» и «раздавленная» капли

1 этап. Обезжирить стекло, протерев рабочую поверхность стекла мылом, которое затем удаляют салфеткой.

studopedia.org — Студопедия.Орг — 2014-2019 год. Студопедия не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования (0.001 с) .

Методы приготовления и окрашивания микроскопических препаратов

Микроскопический метод исследования предусматривает наблюдение за живыми и убитыми бактериями в окрашенном и неокрашенном состоянии.

Смотрите так же:  Проживание в крыму судак частный сектор

С целью изучения формы и подвижности бактерий микроскопию микроорганизмов можно проводить в живом состоянии без окрашивания. Для этого готовят мазки «раздавленная» и «висячая» капля и наблюдают их с помощью темнопольной и фазово-контрастной микроскопии.

Приготовление мазка «раздавленная капля».На предметное стекло по центру наносят каплю или жидкой культуры или физ.раствора, в который вносят исследуемую культуру. Нанесенную на предметное стекло каплю раздавливают с помощью покровного стекла. Затем на покровное стекло наносим каплю иммерсионного масла и микроскопируем. При фазово-контрастной микроскопии мы будем наблюдать подвижность и форму бактерий темного цвета на светлом фоне. При темнопольной микроскопии – подвижность и форму бактерий светлого цвета на темном фоне.

Для изучения микроорганизмов в окрашенном виде на предметном стекле делают мазок, высушивают, фиксируют и после этого окрашивают.

Различают простые и сложные способы окраски. Первые основаны на применении какой–либо одной краски (или метиленового синего или фуксина). Сложные методы предусматривают воздействие на один и тот же препарат двух красок. Сложные методы окраски позволяют обнаруживать в теле микробной клетки различные структурные элементы (капсулы, споры, включения).

Предметные и покровные стекла, употребляемые для приготовления препаратов должны быть чистыми и хорошо обезжиренными (с помощью хозяйственного мыла).

Из жидких культур каплю материала наносят на предметное стекло и размазывают петлей. Из культуры на плотной среде петлей берут частичку, размешивают в заранее нанесенной на предметное стекло капле физиологического раствора и размазывают по стеклу. Мазку дают высохнуть на воздухе, затем его фиксируют над пламенем спиртовки (горелки), держа стекло мазком вверх, и трижды проводят через пламя спиртовки. Время фиксации не должно превышать 5-6с. Кроме жара, для фиксации используют 96 град. спирт, погружая в него мазок на 15-20мин. После фиксации мазок готов к окрашиванию.

Методика окраски по Граму.Особенностью окраски по Грамму является неодинаковое отношение различных микробов к красителям. Микробы, входящие в группу грамположительных, например стафилококки, стрептококки, дают прочное соединение с красителями и йодом. Окрашенные микробы не обесцвечиваются при воздействии на них спиртом, вследствие чего при дополнительной окраске фуксином грамположительные микробы не изменяют первоначально принятый фиолетовый цвет. Это объясняется строением клеточной стенки грамположительных бактерий. Основным компонентом толстой клеточной стенки этих бактерий является многослойный пептидогликан, с которым ковалентно связаны тейхоевые кислоты. Грамотрицательные бактерии (гонококки, менингококки, возбудители кишечных заболеваний) образуют с генциановым фиололетовым и йодом легко разрушающееся под действием спирта соединение, в результате чего они обесцвечиваются и затем окрашиваются фуксином в красный цвет. Клеточная стенка таких бактерий представлена тонким слоем пептидогликана.

1. На фиксированный мазок наносят раствор генцианового фиолетового на 2мин.

2. Затем сливают краситель и, не промывая мазок, наливают раствор Люголя на 1мин.

3. Сливают раствор Люголя и наносят на 30сек 96 град спирт, пока не перестанет отходить краситель.

4. Мазок промывают дистиллированной водой и окрашивают в течении 2 мин раствором фуксина.

5. После чего сливают краситель, мазок промывают водой и высушивают. Грамположительные бактерии окрашиваются в синий (фиолетовый) цвет, а грамотрицательные бактерии – в красный.

Методика окраски по Бурри-Гинсу.Некоторые виды бактерий продуцируют слизистое вещество, которое концентрируясь вокруг тела микробной клетки, образует капсулу. Данная окраска служит для выявления у бактерий капсул.

1. На середину предметного стекла наносят капельку туши и смешивают ее петлей с каплей культуры.

2. Делают мазок ребром покровного стекла, дают высохнуть и фиксируют над пламенем горелки.

3. Затем промывают дистиллированной водой и красят 5-10 мин фуксином.

4. Затем вновь мазок промывают водой и высушивают. При микроскопии бактерии окрашиваются в красный цвет, фон черный, а капсулы неокрашенные.

Методика окраски по Ожешко.Этот метод служит для выявления у бактерий спор. Споры имеют вид круглых или овальной формы образований, находящихся в теле микробной клетки. Различают три вида расположения спор по отношению к длинной оси палочки: центральное – спора находится в центре тела микроба, субтерминальное – спора расположена ближе к одному из ее концов, терминальное – спора располагается на конце палочки.

1. На высушенный нефиксированный мазок наливают 0,5% раствор хлористоводородной кислоты и подогревают 1-2мин над пламенем горелки до закипания.

2. Остывший препарат промывают водой, высушивают и фиксируют над пламенем спиртовки.

3. Затем на мазок наносят раствор фуксина Циля и нагревают над пламенем спиртовки до отхождения паров.

4. После того как препарат остынет, обесцвечивают его 5% раствором серной кислоты, промывают водой и докрашивают метиленовым синим в течении 3-5 мин, затем промывают водой и подсушивают. Споры, окрашенные фуксином имеют красный цвет, тело микробной клетки – синий цвет.

Методика окраски по Цилю-Нильсенудля кислотоустойчивых бактерий (возбудители туберкулеза и проказы). Особенностью микробов этой группы является то, что они плохо воспринимают окраску. Для того чтобы окрасить кислотоустойчивые микроорганизмы, приходится применять более концентрированные растворы красителя в подогретом состоянии с протравами и удлиненным сроком окраски.

1. Фиксированный над пламенем спиртовки мазок окрашивают в течение 3-5мин фуксином Циля с подогреванием до появления паров.

2. Дают препарату остыть, промывают водой.

3. Обесцвечивают в течение 3-5 с в 5% растворе серной кислоты.

4. Препарат промывают водой.

5. окрашивают метиленовым синим в течение 3-5 мин.

6. Промывают водой, подсушивают и микроскопируют.

При окраске препаратов по методу Циля-Нильсена кислотоустойчивые бактерии окрашиваются фуксином в рубиново- красный цвет и не обесцвечиваются кислотой. Некислотоустойчивые бактерии, а также элементы ткани и лейкоциты под действием кислоты становятся бесцветными и приобретают цвет дополнительного красителя (синий).

Тесты по теме:

1. Метод окрашивания для выявления капсул:

г) Цилю- Нильсену

2. Метод окрашивания для выявления спор:

г) Цилю- Нильсену

3. Кислотоустойчивые бактерии окрашиваются по методу:

г) Цилю- Нильсену

4. Дифференциально-диагностическая окраска бактерий:

г) Цилю- Нильсену

5. Перечислить грамположительные бактерии:

а) стафилококки, клостридии

б) кишечная палочка, сальмонелла

в) стрептококки, гонококки

6. Перечислить грамотрицательные бактерии:

а) менингококки, гонококки

б) кишечная палочка, стафилококки

в) стрептококки, сальмонеллы

7. Перечислить спорообразующие бактерии:

а) сибирская язва, клостридии

б) пневмококки, стрептококки

в) клебсиелла, стафилококки

8. Перечислить капсулообразующие бактерии:

а) пневмококки, клебсиелла

б) сибирская язва, стрептококки

в) шигеллы, сальмонеллы

Дата добавления: 2014-11-10 ; просмотров: 4295 . Нарушение авторских прав